什么是制备型 HPLC?
制备型HPLC是可以分离和收集组分的高效液相色谱( HPLC )。
通过对主要成分进行精制可以提高纯度,并且可以收集样品中所含的杂质等微量成分。制备型HPLC的原理与普通HPLC分析相同,因此通过选择合适的色谱柱,可以根据化合物的各种特征,如化学结构、分子量和3D结构,分离和纯化各个组分。
此外,通过改变色谱柱尺寸和设备配置,制备型 HPLC 可以将获得的目标产物的量从毫克改变到千克。
制备型 HPLC 的应用
1.化学合成后目标成分的纯化
制备型HPLC的一个特点是它可以利用HPLC的高分离能力。如果您可以在 HPLC 上获得分离的峰,则可以单独分离每个峰。
在有机化学、生物化学等领域,通过化学合成或生物催化剂合成获得的样品除主要成分外,还含有杂质、副产物等多种微量成分。使用柱纯化和重结晶等常规纯化方法很难选择性地仅提取一种成分。另一方面,对于制备型HPLC,如果可以进行HPLC分离,则分离的可能性很高。
2. 通过主成分和杂质的制备分离进行副反应分析
在制备型HPLC中,通过HPLC分离的每个峰都可以作为单独的级分收集,因此可以选择性地收集高纯度的主要成分和杂质。例如,在材料行业中,高纯度样品用于利用制备型HPLC获得的高纯度目标物质来评估材料和物理性质。
此外,在化学工业中,通过高纯度杂质和副产物的结构分析来分析反应系统中发生的副反应。
3. 蛋白质和聚合物的纯化
在生物系统中,制备型 HPLC 通过尺寸排阻色谱 (SEC) 柱来纯化蛋白质。在聚合物领域,我们使用SEC柱来纯化聚合物,进行分子量分级,并评估各组分的物理性能。
4.天然产物的纯化
HPLC 的高分离能力有时用于从含有各种化合物的天然产物样品中提取目标物质。反相柱因其高分离能力而经常被使用。
制备型高效液相色谱法原理
制备型 HPLC 的分离机理与分析型 HPLC 类似。与常规柱纯化和重结晶等其他纯化方法不同,制备型 HPLC 的优势在于它可以以与分析几乎相同的分离能力进行纯化。
HPLC柱填充多孔硅胶或表面用烷基等官能团修饰的硅胶。填充的材料称为固定相,最常用的是十八烷基(ODS,C18)基团修饰的硅胶。当样品溶液注入柱中时,样品的每种成分与固定相相互作用或分配到固定相中。
这种相互作用的强度或分配程度取决于每种组分的物理化学性质,因此每种组分在通过色谱柱时会分离。HPLC的原理就是通过这种方式分离各个组分。